要想流式做得好，荧光知识少不了
上一期我们讲到流式实验的三大要素是样本（细胞或颗粒）、流式细胞仪和荧光素偶联抗体，进而讲到了荧光素的选择问题，本期让我们回过头来了解了解常见荧光素的特点。荧光素按激发光波长来分，主要是激发波长为375 nm、405 nm、488 nm和633 nm 4类，其中，常用的是激发波长为488 nm和633 nm的荧光素，如FITC、PE、APC、PI等。 激发波长为488 nm的荧光素 1. 异硫氰酸荧…
2020-06-02
流式操作步骤：表面抗体染色
细胞样本 取100ul细胞悬液（细胞计数后用流式染色缓冲液 Flow Cytometry Staining Buffer调整浓度为1×107/mL） 加入适量的表面抗体，室温避光孵育15min（抗体用量和孵育条件详见抗体说明书） 加入1~2ml流式染色缓冲液，300g离心5min弃上清 用 500ul 流式染色缓冲液重悬细胞，上机检测并分析如不能立即检测，用0.5ml 0.1~4%多聚…
2019-10-25
多色流式中荧光补偿调节方法与步骤
尽管多色流式细胞术目前已被广泛应用，但是荧光补偿的准确调节却是很多人实验中遇到的一大难题。 我们先来看看为何要做荧光补偿这个动作？ 每一种荧光分子都发射某一特定波长范围内的光，然而这些荧光的发射光谱会发生重叠，“荧光补偿”是指修正荧光渗漏的过程，从某个探测器除去除匹配荧光以外的其他任何荧光信号的过程即为荧光补偿。荧光补偿过程从原理上来说相对简单，但实际上涉及许多精细、敏感的…
2016-07-04